激光作为荧光成像的光源给成像系统和它们的组件带来了种种要求。例如，基于激光构建的成像系统的滤光片相比于以宽带光源为基础的成像系统就更明确的要求。

尽管有不同的观点，激发滤光片对于纯化来自激光光源的激光来说非常重要。这种纯化包括除去固态激光器内的自发辐射线和气体激光器内的等离子线。另外这些滤光片必须能够承受足够高强度的激光光束。和使用了几十年的传统软膜荧光滤光片不同，Semrock的离子束溅射制成的硬膜滤光片拥有高的激光损伤阈值。硬膜滤光片具有高光学耐久度，强大的环境可靠性，性能几乎不会因为温度和湿度而退化。对于大多数荧光显微成像而言，滤光片不再是消耗品。

激光的激发滤光片也有独特的波长要求。一些激光器，比如气体激光器和DPSS激光器，拥有精确窄带宽的激光线，然而选择窄带宽滤光片和可能使用的相似波长的复合激光系统（比如激发绿色荧光蛋白的473 nm和488 nm波长激光系统）不相匹配。二极管的光谱输出和光泵浦半导体激光器的激光波长随着温度变化，以及激光器使用时间能够有明显的变化。对于大多数激光显微系统而言采用和宽波带光源显微镜系统相似的长带宽激发滤光片和是不错的选择。例如，我们设计把semrock四波段激光滤光片组的用于375和405 nm波长的紫外吸收带激光。在长波段边缘即405 nm波长有5 nm的误差。


一款典型的滤光片应该在所有可能被用于滤光片组的激光波段提供高的阻止（大于OD6），从而确保背景信号最低，与此同时尽可能透过发射信号。值得注意的是并不是所有的宽带光源发射滤光片都能对激光提供了充足的阻止，从而导致在图像对比度上有明显的弱化。

激光系统内的二向色镜不应该仅仅被制成兼容激发和发射滤光片的反射和通过带宽，还应该覆盖有防反射涂层来保证发射滤光片的最大透过和消除相干干扰。由于二向色镜直接暴露在很强的激发光束中，滤光片内的自发荧光也会污染发射信号。制作时应该使用具有极弱自发荧光信号的基板，例如石英玻璃。

二向色镜在一般的实验上对于图像质量上有很重要的影响，当二向色镜的平整度不适合时这种影响尤其明显。对大多数的激光显微镜而言，二向色镜的平整度应该达到使激光束的焦点没有明显的移动或者说移动小于瑞利范围。这是像全内反射荧光显微镜和结构照明这样的试验中的关键。

某些高标准实验例如用全内反射荧光来单分子成像对于发射滤光片有很高的标准，成功的实验要求尽可能的过滤掉激光信号并收集每一个来自荧光团的光子。在这种情况下，常规的带通滤光片可能被一个边缘固定在激光束波长的长波通滤光片替换。在我们的观察中，在全内反射系统内再加一个发射滤光片也是有益处的。第二个滤光片需要与第一个发射滤光片物理隔离来确保更高角度的散射激发光不会通过整个成像通道到达探测器。

综上所述，激发和发射滤光片以及二向色镜需要设计成互补的来获得最佳的荧光成像质量。光学滤光片在复杂昂贵，基于激光构建的显微镜系统取得最好性能的尝试中扮演者重要的角色，为了提高成像质量把钱花在滤光片上是有意义的投资。